Inhibitory Effect of a Soil Isolate of Bacillus amyloliquefaciens on Aflatoxin B 1 Production by Aspergillus parasiticus in Laboratory Conditions

Transcription

1 Original Article Downloaded from mjms.modares.ac.ir at 10:08 IRDT on Saturday August 18th 2018 Inhibitory Effect of a Soil Isolate of Bacillus amyloliquefaciens on Aflatoxin B 1 Production by Aspergillus parasiticus in Laboratory Conditions Fatemeh Siahmoshteh 1, Zohreh Hamidi-Esfahani 2, Mehdi Razzaghi-Abyaneh 3* 1- Ph.D. Candidate, Department of Food Science and Industry, Faculty of Agriculture, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran 2- Associate Professor, Department of Food Science and Industry, Faculty of Agriculture, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran 3- Professor, Department of Mycology, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran *Corresponding Address: Postal Code: , Department of Mycology, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran mrab442@yahoo.com Received: 05/Sep/2016, Accepted: 05/Feb/2017 Abstract Objective: The concern about the presence of aflatoxin and its risk for human and animal health has resulted in the introduction of different methods to eliminate or reduce this toxin. One of these methods is biological control of the fungus by other microorganisms. Methods: We isolated a strain of Bacillus amyloliquefaciens from the soil of a pistachio orchard, Damghan, Iran. This strain was applied as a biological control to examine the inhibition of growth and toxin production by Aspergillus parasiticus NRRL2999. After 72 hours of incubation of the bacterium at 30 C, we separated the supernatant as a potential source for antifungal compounds. Different doses of the supernatant were co-cultured with the fungus suspension in glucose yeast extract broth (GYB) at 28 C for 4 days. After the incubation period, we measured the inhibition of fungal growth by dry weight assessment of the fungal mass. We performed qualitative and quantitative assessment to determine the amount of aflatoxin B 1 by TLC and HPLC, respectively. Results: Increased bacterial culture supernatant as the antagonist in fungal growth medium resulted in decreased fungal growth. AFB 1 production was 2.35 ppm in control samples, whereas the amount considerably decreased in samples treated by the bacterial supernatants. The toxin reduction was dose-dependent. Conclusion: The results of this study have shown that this bacterial strain, by taking into consideration its native origin, can be used as a biological control against aflatoxigenic fungi. Keywords: Biological control, Aflatoxin B 1, Aspergillus parasiticus, Bacillus amyloliquefaciens Pathobiology Research, Vol. 19 ( ), No.3, Pages: Pathobiology Research, Vol. 19 ( ), No. 3 33

2 اصیل مقاله Downloaded from mjms.modares.ac.ir at 10:08 IRDT on Saturday August 18th 2018 تولید بر خاک از شده جدا آمیلولیکوفاسینس باسیلوس سویه یک مهاری تأثیر آقالتوکسین چكيد B 1 شرایط در پارازیتیکوس آسپرژیلوس قارچ بهوسیله آزمایشگاهی *3 2 1 ابیانه رزاقی مهدی اصفهانی حمیدی زهره مشته سیاه فاطمه ایزان تهزان مذرس تزبیت دانطگبه کطبورسی دانطکذه غذایی صنبیع و علوم تخصصی گزوه دکتزی دانطجوی 1- ایزان تهزان مذرس تزبیت دانطگبه کطبورسی دانطکذه غذایی صنبیع و علوم گزوه دانطیبر 2- ایزان تهزان ایزان پبستور انستیتو ضنبسی قبرچ بخص استبد 3- ضنبسی قبرچ بخص ایزان پبستور انستیتو کذپستی: تهزان ایزان مسئول: نویسنذه آدرس mrab442@yahoo.com 45/66/15 مقبله: دریبفت 45/11/17 مقبله: پذیزش ذ ثب د س دا ا ذبر ي ا ا ؼذب ز ػذال ثذشاال ػذ يذ ا وذ خغشاسذي غذزايي اد دس آفالس وؼي ج د اص شا ي دف: سيضص ذذ ذبال س ػذظ لذبسو صيؼذشي و شذش س ؽ ب اي ج اص اػز ؿذ ػ اي وب ؾ يب ازف خش ف سا بال ديذايؾ ذب دا ؿ شػذشب ثبغذبر اص دؼذش ثذبه خذبن اص ؿذذ جذذا آ ي يى فبػذي غ ثبػي ع ثبوششال اص سحميك اي دس اػز. دي ش بس ثشاال صيؼشي و شش ب ا ث ؿذ. اػشفبد NRRL2999 اػذشب ذاسد دذبساصيشيى ع آػذذشطي ع لذبسو آفالس وؼذي س يذذ سؿذ ذذ سشويجذبر جذ ذ ا ثذ آ س يذي ذبي ػب شي شاد دسج 30 د بال دس ثبوششال وز ز ػب 72 اص دغ ر ش ا: ه اد بي اص خش ف غ ظز بال ؿذ. جذاػبصال لبسچي ثذ ذذر GYB وذز حذيظ دس لذبسچي ػ ػذب ؼذي جب سر دس س يي خذه ص حبػذج س ؽ ثذ لذبسو سؿذذ بس يضا ذر اي اص دغ شفز. لشاس ػب شي شاد دسج 28 د بال دس س ص چ بس ويفذي ػذ جؾ HPLC ذبصن يذ وش ذبس شافي س ؽ ثذ يذض ب B 1 آفالس وؼي يضا ؿذ. حبػج لبسچي س د ؿذ. و ي بي يضا افضايؾ ثب شبيج اػبع ثش تایج: وذب ؾ لذبسو سؿذذ حذيظ دس آ شب يؼذز ذبد ذ ا ثذ ثذبوششال وذز س يي يذضا ايذ وذ سػذيذ 2/35 ppm اذذ د ث و شش بال دس س يذال B 1 آفالس وؼي ؿذ. ب ذ لبسو سؿذ ثشاال ثيششال بي ثب ؿذ سي بس بال دس بي ث د. س يي تيج گيری: غ ظذز ثذ اثؼذش يذض وذب ؾ ايذ يذضا ثذ د. وذشد ديذذا وذب ؾ ؿذذر ثذ ثذبوششال س يي ػذ ي ايذ اص ذيسذ ا ظش سد ثبوششيبيي ػ ي ث د ث ي ث س ج ثب سحميك اي آ سد بال دػز ث س ج ثب وشد. اػشفبد آفالس وؼي ذ لبسو بال صيؼشي و شش ب ا ث کليد اژگاى: آفالس وؼي صيؼشي و شش آ ي يى فبػي غ ثبػي ع دبساصيشيى ع آػذشطي ع شماره 3 پاییس 9315 صفحات: پژوهشهایآسیبشناسیزیستی دوره 91 B آسیبشناسیزیستی دوره 91 شماره 3 پاییس پژوهشهای 43

3 هقده س وؼذي ذب اص خذب اد اال )Aflatoxins( آفالس وؼي ب آػذذشطي ع خذب اد وذذه ذبال اب يذ شبث يذز و اػز ؿذذ ؿذ بخش بيى س وؼذي لذ السذشي )Aspergillus( ؼذش ذ ثيس ثيعع ثيث آفالس وؼي ب سشويجبر اػز. سشويجذبر ايذ جذ د داس ذ. بث ي ؼجشب ؿي يبيي ػبخشبس ا ؼذشب دس ث ل ذ ذضاس كذ ؿذ س ف ثب 1960 ػب دس آفشيمذب اص ؿذذ اسد ص ي ذي ثذبدا اذب ال خذ سان اص وذ ايذ اص ؿذذ. حذشص ث د ذذ وذشد لذشف ج ذ ثي آ شيىبال Aspergillus ( فذال ع آػذذشطي ع وذه ؼ خ سان ذب آفالس وؼي وذه اي ؿذ س يذ ػ ؿذ جذا )flavus ]1[. شفز خذىجبس ب ذذ خش ذف غذزايي ذ اد دس ػ اي ج د ؿذذ ( خذه ا جيش ثبدا ف ذق شد دؼش ص ي ي )ثبدا اػذز. سػذيذ ااجذبر ثذ ؿذز ج يبر اج ثبر غالر ذ سذشي و داسد شا ث ثؼيبسال اسم ػ اي لشف اػز. وجذ ػشعب ايجبد آ آػذشطي ع لبسو بال اص ثشخي س ػظ سشويجبر اي.A ( دذبساصيشيى ع آػذذشطي ع فذال ع آػذشطي ع ب ذ )A. nomius( يذذذ ع آػذذذشطي ع )parasiticus س يذذ.A( ochraceoroseus( اوشاػ س ػئ ع آػذشطي ع آفالس وؼذذي س يذذذو ذذذ ػذذ ي ذبال ثذذي اص ذيؿذذ ذ. ذ چ ذبس ذش س يذذ ث لبدس و دبساصيشيى ع آػذشطي ع آفالس وؼذي تولیدآفالتوکسیهB1 کنترل G 2 G 1 B 2 B 1 اػذذشب ذاسد ذذ ا ثذذ اػذذز 2[. ]1 يؿ د س مي س وؼي صا ػ ي بال اص دذغ شا ذ دس آفالس وؼذي ي آ ذ د ي ثذشد ثذي اص فيضيىذي خش ذف س ؽ ذبال ؿذي ذب ث سبو ثشداؿز يذب فيضيىذي فعذب ػذبصال غيذش ج ذ اص صيؼذشي يذب ؿي يبيي حذذ ديز ذبال اػذز. شفشذ ا جب آفالس وؼي ب ؿي يبيي صيؼذشي س ؽ ذبال اص اػذشفبد ث جش غيشصيؼشي س ؽ بال و شذش دس يب ي لبس جبر سيضص ذ ب ث وبس يشال ؿب ثذبوششال ذبال اخيذش ػذب ذبال دس اػذز. ؿذ لبسچي ػ وذ ؿذذ ا ذذ ذضاسؽ صيؼذشي و شذش ب ا ث خش في )Bacillus( ثبػذذي ع جذ غ ذبال خش ذف ذ ذبال ثذ ؿذ بس آ ذب سشي اص )Pseudomonas( ػ د بع يس ذ. بال اص جبسس ذ اػشفبد سد ثبوششيبيي بال ػبيش )Mycobacterium( بيى ثذذبوششي جذذ غ ذذبال خش ذذف ثذذذذبوششي و سي ذذذذ )Rhodococcus( س د و وذذذذ ع )Lactobacillus( وش ثبػذي ع,)Corynebacterium(.]4 3[ )Bifidobacterium( ثيفيذ ثبوششي ذ ذبال صيؼذشي خل كذيبر س ال صيبدال سحميمبر Bacillus ( ػذ ثشي يغ ثبػذي ع خل كذب ثبػي ع ج غ ثذشاال يذبص سد خل كيبر صيشا اػز ؿذ ا جب )subtilis مذب ثذ د غيشثي ذبسالصا ؿب و صيؼشي و شش ب يه ]8-5[. ؼذذش ذ داسا سا اػذذز ط شيىذذي دبيذذذاسال ثذذ د ؿذب يذ دش سئي ج غ اص سشويجبسي س يذ ث لبدس ثبػي ع ب ايذ وذ ؼذش ذ )Fengycin( ف جيؼذي )Iturin( ايش سي ايذ چ ذي ]9[. داس ذذ لذبسچي ذذ خبكذيز سشويجذبر )Chitinases( ويشي ذبص ب ذذ سشؿذحي آ ضي بال ثبوششال ب سجضيذ س ا ذبيي وذ يو ذ س يذ سا )Glucanase( وب بص داسد. سا لبسو ػ ي دي اس اجضاال آفالس وؼذي وذب ؾ س ال سحميمذبسي ػ صدايي ص ي دس اػذز داد ذب وذ شفشذ ا جذب ػذ ذذ لذبسو ذبال سجضيذ ث لبدس و داس ذ سا سشويجبسي س يذ س ا بيي ب ثبػي ع وذب ؾ يذضا ىذبسا فشصا ذ اػذز. ؿذذ س يذذ ػذ آفالس وؼي B 1 وذز س يذي ذبي ثذ ػذي بي حيظ دس يذضا ثيذششي وذ وذشد ا ذذ ثشسػي سا ػ ثشي يغ ثبػي ع 30 د ذبال دس ا ى ثبػي ز ػب 72 ص ب ذر دس ػ سجضي يذض )Kim( وي )Lee( ي ]4[. افشبد اسفبق ػب شي شاد دسج ثبػذذي ع اص ػذ ي اال س ػذظ ذذذلبسچي سشويجذبر س يذذ عجذك د ذذ. غب عذ خش ف وز ؿشايظ دس سا ػ ثشي يغ وذز ثشاال خش ف ا شخبثي حيظ چ ذي ثي اص ب آ شبيج Luria-( LB حذذيظ اص ؿذذ ثشداؿذز س يذي ذبي ثذبوششال 35 Pathobiology Research, Vol. 19 ( ), N

4 فاطمهسیاهمشتهوهمکاران )Trypticase Soy Broth( TSB )Bertani Broth اص ػذيعي عيذف يذ سا لذبسچي ذذ خبكذيز ثيذششي ]10[. داد ذ ب ثي بسالصا لبسو بال سحميذذك ايذذ دس ثبػذذي ع ثذذبوششال اص ػذذ ي اال اص اص ؿذذ. اػشفبد.B( amyloliquefaciens( آ ي يى فبػي غ ثبغذبر اص آ جذاػذبصال آ ثذ د ثذ ي ػ ي اي ضايبال آػذشطي ع خب اد لبسو بال اض س اك ي ح يع ي دؼش ػذ ذذ وذذه يذ ػذ ي ايذ لذبسچي ذ فعب يز ث د. ؿذذ ثشسػذي NRRL2999 ػ ي دبساصيشيى ع آػذشطي ع وذب ؾ ثذش س يذي بي ااش آ ث د آ شب يؼز ااجبر اص دغ آفالس وؼذي B 1 س يذذذال آفالس وؼذي خغش ذذبنسذشي وذ ؿذ. ثشسػي اػز دبساصيشيى ع آػذشطي ع لبسو ث ػي ر ش ا ه اد کطت ضرایط هيكر ارگا يسن ا دؼذش ثبغذبر خبن اص لج ي غب ع دس و ثبوششيبيي ػ ي يىش ثذي ثب ذه دس ثذ د ؿذذ جذاػذبصال ذب دا ؿ شػذشب دذغ غب ع سد ػ ي يؿذ. ذاسال ايشا دبػش س ا ؼشيش سذ ا ي ؿ بػذبيي ىذ ي ثشسػي ثب DNA اػشخشاج اص اػذذشخشاج ؿذذ. داد سذذخيق آ ي يى فبػذي غ ثبػذي ع )آ شيىذب( Qiagen ؿذشوز اػذشخشاج ويذز و ذه ث DNA دس PCR فشآي ذذذ 16srRNA ط يذذش سى ثذذشاال ؿذذذ. ا جذذب آغذبص ش اص آ دس وذ ؿذذ سش ػبيى شا جب دػش ب ذ ي سأييذذ ؿذ. اػشفبد ثبوششال ب خل ف )Universal primer( ط س ال ا ىشش فذ سص و ذه ثذ PCR فشآي ذذ دس ط يذش سى ذب دساح و ذه ث DNA غ ظز ؿذ. ا جب دسكذ 1 آ بسص سذ ا ييذبثي ثشاال سليكػبصال اص دغ ثشسػي )Nanodrop( بيز ذ ػ س د س ذزو ا ي ذ س ا ي ذ س ذي سعي ص ا ذغ د. ذذ ؿ ب سػ ا دسكذذ 99 ااش ب ثب ضديهسشي ؿذ جؼشج NCBI ]11[. ؿذ ؿ بػبيي آ ي يى فبػي غ ثبػي ع ثبوششال فشيضس اص خش ج اص دغ Brain Heart Infusion ( BHI ب ذذ غ ذيو ذذ حذيظ ثذ 30 د ذبال دس ز ػذب 24 ث ذذر اس ب ؿذ. بف ا )broth لذشاس 120 د س ثذب بعيؼذي ض س ال ػب شي شاد دسج سىشاس ػ دس وز ش اص ي ي يشش 0/5 يضا آ اص دغ شفز. اذب ال اس ذبال ؿذ. بف ا LB وز حيظ اب ال اس ث ػب شي شاد دسج 30 د بال ثب ا ى ثبس س دس ثبوششال وز حيظ ػذب ششيف ط ذر اي اص دغ ؿذ. داد لشاس ز ػب 72 ث ذر بي ا جب حيظ وب ذ ازف ثشاال ػذغ ؿذ جذا س يي 0/2 ػذش ي في شذش ثذب وشد كبف ثبوششيبيي ػ بال شفز] 9 [. ا جب يىش ي 0/1 ح ذ اص لذبسو اػذذ سال ػ ػذب ؼذي س ي ثشاال يذضا ؿذ بسؽ ؿذ اػشفبد )Tween )80 80 س يي دسكذ ئ ثذبس و ذه ثذ يذض ػ ػذب ؼذي دس جذ د اػذذ س ؿذ. ا جب )Neubauer( زى هحاسب ر ش ب قارچ رضد ه ار بررسی خطک GYB حيظ اب ال خب ؿؾ د يز بال اص س ؽ اي دس آ ثذ وذ ؿذذ اػذشفبد )Glucose Yeast Extract Broth( 10 7 غ ظز ثب لبسو اػذ س ػ ػذب ؼي اص يىش يشش 50 يضا اص ابكذ س يذذال س يذي بي ؿذ. بف ا يشش ي ي دس اػذ س بف ا لبسو سؿذ حيظ ث خش ف ؼجز بال دس ثبوششال وز 5 چب ذه ذش ذبيي )اجذ چب ذه اجذ ثميذ ث ؿذ وذب ؾ ججذشا ثشاال ؿذ. بف ا GYB وز حيظ ي ي يشش( حبػذج ثذب چب ه ش دس لبسو سؿذ يبص سد GYB حيظ دسكذذ )2 ذ وض د دس بػت يضا حيظ اي و ج د يضا دغ ص ي/اج ي( دسكذ )0/5 خ ش لبس ص ي/اج ي( ث حيظ ثب خ ط ث ك سر ػش ي في شش ثب ػشش ػبصال اص س ص چ بس ث ذر د يز ب ػذغ ؿذ. بف ا دي ش چب ه بال زؿز اص دغ ؿذ. ش ب زاسال ػب شي شاد دسج 28 د بال دس سي بس چب ه ش ػغح اص وشد سؿذ يؼ ي ي س د ذر اي 36 آسیبشناسیزیستی دوره 91 شماره 3 پاییس 9315 پژوهشهای 43

5 بي ثب ؿذ ج و شش چب ه س يي د بال ثب آ دس آ سال تولیدآفالتوکسیهB1 کنترل ذش ػذذغ ؿذ. خه ز ػب 3 ث ذر ػب شي شاد دسج 80 يذضا ؿذذ سذ صي لبسو( خه ) يؼ ي ب اص يه و شذش چب ذه اص ابكذ ذ ث ؼجز آ ب ص وب ؾ ]12[. ؿذ شفش ظش دس سؿذ بس يضا ا ث در قارچ ت سط ت ليدآفالت کسيي ه ار بررسی آ تاگ يست هجا رت B 1 سؿذذ بس آص بيؾ اص ابك يؼ ي وشد جذا اص دغ ث ػي چب ه ش دس وز اص ثبلي ب ذ بي اص ي ي يشش يه سسىغ ثبس چ ذي اص دغ ؿذ. اػشخشاج و ش فش ي ي يشش يه اذب ال وذ ثخذؾ د اص ابك صيشال بي )Vortex( وشد يي ثذب ثخذؾ ثذ ؿذ خبسج اػز آفالس وؼي و ش فش ؿذ. سىشاس ثبس ػ سب اػشخشاج ؿذ. بف ا و ش فش جذدا بخب لي ب ازف ثشاال ؿذ يىي و ش فش ي ثخؾ بال ػذغ خه سب ب ظشف بال ػذغ ؿذ. داد ج س ؿي د اص دغ شفز. لشاس ؿذيذ س اص د س اسبق د بال دس وب ؿذ سذب ؿذذ بف ا شب يىش يشش 150 يضا ظشف ش ث آ اص آفالس وؼي يضا ؿ د. ا آ دس ؿذ اػشخشاج آفالس وؼي ( ذبصن يذ وش ذبس شافي و ذه ث اػشخشاجي Thin High ( HPLC دػش ب )Layer Chromatography: TLC ثذ عذ س ث سشسيت )Presuusure Liquid Chromatography ؿذ. اسصيبثي و ي ويفي آفالت کسنيي سن جص B 1 TLC کونک بن HPLC س ػذظ آ ا يذ ػذ جؾ آفالس وؼذي اػشخشاج اص دغ ػي يىبط د يز اص اػشفبد ثب آص اي شفز. ك سر TLC و ش فش اال بال CAMAG ذ TLC سب ه 60F 254 شفز. ا جب شب يذه س ال د يذز دذبيي اص ػب شي شذشال د فبك ثب اثشذا ذ ذبال اص يىش يشش د كبف خظ ؿذذ لذبس يذشال ذ اص ؿذذ ىذ ذزاسال ش فبك ؿذ. ى زاسال 0/2 ثذ 9/8 ؼذجز ثذ سب ه دس ث د. ػب شي شش يه ثعذال لذشاس سب ه دس آسا ي ث د يز ؿذ. سيخش شب و ش فش / ثذب د يذز اص اذال سب ذه دس د يز شفش لشاس ثب ؿذ. داد سا د يذز ؼذبفز وبفي ا ذاص ث اال اي و اص دغ يس د. سذب ؿذذ داد لذشاس آصاد ذ اال دس خبسج سب ه اص وشد عي دس فشاث فؾ س ثب اسبله دس د يز ػذغ ؿ د. سجخيش آ اال آفالس وؼذي ثب ذذ بال شفذز لشاس ب شش 360 ج ع B ذش آفالس وؼذي G ذش آفالس وؼي ؿب ب ؿذ. ب ذ HPLC دػذش ب اص آفالس وؼذي و ذي يذشال ا ذاص ثشاال اػذشفبد فذشاث فؾ آؿىبسػبص ثب آ ب و س KNAUER ذ ذ ج عذ س ال آ س ظذي دػش ب ؿؼش ال اص دغ ؿذ. آفالس وؼي اػشب ذاسد ب شش 365 B 1 خش ذف سلز بال دس دػذش ب خل ف ػش س ػظ ش اص يىش يشش 30 اص خ عي ؿب شحشن ثخؾ ؿذ. سضسيك دػش ب خض ث اج ذي ؼذجز ذبال ثذب شذب آة/اػش يششي اال ػ 1 ز ػش ثب 15/25/60 ( دػذش ب ػذش اص دليمذ دس يشذش ي ي Cosmosil 5-ph-AR-300 Waters; 4.6 mm_150 ثذذشاال )Retention Time( ثمذذب ص ذذب وذذشد. جذذ س )mm آفالس وؼذي بيؾ B 1 كذذفح س ال اص ثذذ د. دليمذذ 10/6 اذذذ د ثذب سلب يش ب ذ ؿذ ايجبد )Peaks( ا ج مبط س ج ثب ب آفالس وؼي غ ظز ؿذ. رخيش JPEG فش ز ]7[. آ ذ ث دػز اػشب ذاسد ح ي ث آهاری تحليل ا حشاف ث ك سر شبيج ا جب سىشاس ػ دس آص ب و ي ثذ ػذي داد ب يب ي مبيؼ ؿذ. ثيب ش ػظ ± اػشب ذاسد ثذشاال Excel SPSS ش افضاس بال اص ؿذ. ا جب LSD آص ؿذ. اػشفبد داس ب سػ داد ب سح ي سجضي 37 Pathobiology Research, Vol. 19 ( ), N

6 فاطمهسیاهمشتهوهمکاران تایج خطک زى هحاسب ر ش ب قارچ رضد ه ار بررسی س ص 4 وذز س يذي ذبي ثذ ػذي لذبسو سؿذذ بس ؿذؾ د يز 1 ؿى دس ؿذ. ثشسػي GYB حيظ دس ثبوششال ب داد ب آص بيؾ ؿشايظ دس ذاسال س ص چ بس اص دغ خب اػز. ؿذ س د خه ص آص اص ؿذ حبػج شبيج ث س ج ثب ث د آ شب يؼز بي يضا ث اثؼش لبسو سؿذ بس لبسچي لذبسو سؿذذ ذبس يذضا آ مذذاس افذضايؾ ثب و ث ع سال آ ي يى فبػذي غ ثبػي ع ثشاال سؿذ بس وشد. ديذا افضايؾ ث د. يش ش دسكذ 82 سب 45 اص بي ذبي س ػذظ دبساصيشيى ع آػذشطي ع سؿذ ثبصداسال 1 ضكل يىش يشذش 3000 ذب ث ذ ذ ؿ ذبس ي س ه ذ چب ) ف ذ ا ( ش ذ ش و ه ذ چب غ. ي ذ ػ فب ى ي ي آ ع ي ذ ػ ثب ذي ي س )د( ثبوششال س يي بي يىش يشش 750 ثب ؿذ سي بس چب ه )ج( ثبوششال س يي بي يىش يشش 1500 ثب سي بسؿذ چب ه )ة( ثبوششال س يي 38 آسیبشناسیزیستی دوره 91 شماره 3 پاییس 9315 پژوهشهای 43

7 در قارچ ت سط ت ليدآفالت کسيي ه ار بررسی آ تاگ يست هجا رت داد ذبيؾ ؿذى 2 دس ذ ذب TLC اص ابك شبيج و شذش ذبال ديذاػز ؿى اص و ع س ب اػز. ؿذ بي ثب ؿذ سي بس بال ؼجز ث سا لذ ال ثب ذذ د س يي آفالس وؼذي ذبال ذب د ذذ يي ثذب ثب ذ و يد ذ ب B ذش آفالس وؼذي ذبال ب د ذذ دبيي ثب ذ G ش اػز. دس ؿذذ ا بال اص يه ش اص يىش يشش ػي يضا وذب ؾ و ذي يذضا سذب ؿذذ سضسيك HPLC دػش ب ث شب وش ذبس شا 3 ؿى ؿ د. ثشسػي ش آفالس وؼي آفالس وؼي اػشب ذاسد سضسيك اص ابك تولیدآفالتوکسیهB1 کنترل B 1 HPLC دػذش ب ث اص يذه ذش آفالس وؼذي يضا 2 جذ دس يد ذ. ب سا اػز. ؿذ خق سي بس ب ذبي اذب ال لذبسو وذز ذبي حيظ دس ش اب آص بيؾ دس آفالس وؼذذي يذذضا ثذبوششال سؿذذذ اص ابكذ س يذذي ثذ د. وذشد ديذذا وب ؾ و شش ؼجز ث ؿذ سي بس بال ذب سا ذ ذش ثشاال آفالس وؼي وب ؾ دسكذ 4 ؿى ثيشش سي بس ب س ػظ آفالس وؼي وب ؾ دسكذ يضا يد ذ. ذب د ذذ وذ اػز 2( )جذ لبسو سؿذ وب ؾ يضا اص سؿذ وب ؾ ثش ال آفالس وؼي وب ؾ دس دي شال ىب يؼ اػز. لبسو خش ف غ ظز بال دس ثبوششال س يي بي س ػظ دبساصيشيى ع آػذشطي ع سؿذ ثبصداسال 1 جد ل )هيكر ليتر( هایعر یی 0 )درصد( رضد ه ار 0 خطک)هيلیگرم( زى 27/5±1/0 15/0±1/1* 12/0±2/0* 5/0±1/0* و شش ثب 0/05<p ػغح دس ع يداس *اخشالف 2 ضكل س يذي ذبي يىش يشذش 3000 يذضا ثذب ؿذذ سي بس و شش ث سشسيت چخ ث ساػز )اص فشاث فؾ س صيش دس ب اص ابك آفالس وؼي ثب ذ بال بي يىش يشش 1500 ثب ؿذ سي بس ثبوششال س يي( بي يىش يشش 750 غ ظز ثب ؿذ سي بس ثبوششال س يي 39 Pathobiology Research, Vol. 19 ( ), N

8 فاطمهسیاهمشتهوهمکاران Downloaded from mjms.modares.ac.ir at 10:08 IRDT on Saturday August 18th 2018 آفالس وؼي اػشب ذاسد سضسيك اص ابك وش بس شا 3 ضكل جد ل HPLC دػش ب ث B 1 بي ) يىش يشش( ثبوششال س يي ثبوششال س يي بي ثب سي بسؿذ بال دس B 1 آفالس وؼي يضا 2 ) ب ش ( حيظ دس س يذال آفالس وؼي يضا 65/26±20/64 لبسو( خه ص ) ب ش / ي ي ش س يذال آفالس وؼي يضا 2/35±0/75 0/24±0/12* 0/08±0/05* 0/05±0/03* 3/65±1/78* 1/00±0/55* 0/23±0/14* و شش ثب 0/05<p ػغح دس ع يداس اخشالف * آفالس وؼي س يذ بس دسكذ 4 ضكل خش ف غ ظز بال دس ثبوششال س يي بي ثب B 1 40 آسیبشناسیزیستی دوره 91 شماره 3 پاییس 9315 پژوهشهای 34

9 بحث ذ ذبال ج ذ اص آ ي يى فبػي غ ثبػي ع ثبوششال جذ غ بال ػبيش ب ذ و اػز ثبوششيبيي ؿذ ؿ بخش سا ؼذششد وذبسثشد ثذب شبث يز ذب اص ػيعي عيف ثبػي ع س يذال آ شيثي سيه بال اص ثؼيبسال و ع سال ث يو ذ س يذ ؿذ بخش داس بال ا ث ج غ اي خش ف بال س ػظ ذيؿذ د. اػذشفبد غزايي اد ذاس ذ بال ا ث ؿذ سشؿذح لبسچي ذ سشويجبر سأايش ثشسػي سحميك اي اص ذف آػذذشطي ع س وؼذي صاال لذبسو ثذش ثذبوششال ث ػذي ؿذ شذبيج عجذك اػز. آ ػ س يذ اص ج يشال دبساصيشيى ع ثذ لذبدس ثذبوششال س يذي بي خش ف غ ظز بال سحميك اي آ ػذ س يذذ اص ج يشال يض ػ ذ لبسو سؿذ وب ؾ وذز س يذي ذبي يذضا افذضايؾ ثذب شبيج ث س ج ثب ث د. لذبسو سؿذذ ثبصداسال يضا آ شب يؼز بد ا ث ثبوششال يىش يشذش 3000 يذضا ثذشاال دسكذذ 82 سذب يبفز افضايؾ ذي يذض ػذ س يذذ ثذبصداسال سد دس سػيذ. آ شب يؼز اثؼذش دذيذذ دذيذذ اي ال دس اػز. ب ذ لبث دذيذ يؿ د. ب يذ )Dose dependent( غ ظز ث آفالس وؼذي س يذذ ثشاال ثبوششال اي وز بي ثبصداسال س يذذ وب ؾ ثب آ يضا ػ ش دس ث د چ يش ثؼيبس ثذب ذبث ي سحميك ث د. ؿذ دسكذ 90 اص ثيؾ سب آفالس وؼي آفالس وؼذي سؿذذ ثبصداسال ثشاال ػ ثشي يغ ثبػي ع ػ ي شفش ك سر دبساصيشيى ع آػذشطي ع لبسو س ػظ س يذال اص ثذيؾ ؿذذ اؿبس سحميك اص ابك شبيج عجك ]13[. اػز آفالس وؼذي وذب ؾ دسكذ 60 سب سؿذ ثبصداسال دسكذ 95 ثبوششال وز اص ابك س يي بي ثب اج دس لبسو س يذال آ ي يى فبػذي غ ثبػي ع ثبوششال اػبع اي ثش ؿذ. ب ذ ثبػي ع ؼجز ث آفالس وؼي س يذ بس دس ثيششال س ا بيي اػز. داؿش ػ ثشي يغ ثذبوششال ذبال آ شب يؼشي ااش ىب يؼ خش في سحميمبر ثبػذذذي ع وذذذشد ا ذذذذ. ثشسػذذذي سا ثبػذذذي ع جذذذ غ دا ذ وذ اػذز جذ غ ايذ ذبال اص آ ي يى فبػي غ تولیدآفالتوکسیهB1 کنترل س يذذ ذذلبسچي ثبوششيذبيي ذذ بال شبث يز اص ػيعي ا ذ ػذذذ س بيي س يذذذ ثذذ لذذبدس ثذذبوششال ايذذ ذذيو ذذذ. فيضيىذي ؿذي يبيي اػششع ذبال ث و اػز )Endospore( س ا ذبيي يذض خل كيبر اي يد ذ. ب يي ثب مب ز ا ذ اص يىذي ثذبوششال اي و ؿذ ثب خبن دس ص ذ ي ؿ بػذذبيي ثذب ]14[. س د ؿذ بس ثذ صيؼذشي و شذش دس ذراش ثيذشش وذ ؿذذ خق ج غ اي لبسچي ذ بال شبث يز سشويجذبر ايذ اص اػز. ب يذ دش سئي خب اد اص سشويجبر اي ذب سا )Surfactin( ػذشفىشي ف جيؼذي ايش سي يس ا سأايش لبسو ػ غبال ػغحي وؾ س ال يس ا ذ و ثشد وذبس وذ ؿذ ذ غب ػغح دس بفزال ايجبد ثب زاؿش اػذز وشد اخشال دچبس سا ػ ايبسي اد خش ج س د ذشي ثذ جذش بيذز دس يسيذضد ث غب س ظي بر آ شب يؼذز ذ اد آاذبس دي ذش اص 16[. ]15 ذيؿذ د ػذ )Ergosterol( اس ػذشش ػ شض ثش ااش ثبوششال س ػظ س يذال ػذ ي غبال اجضاال اص اس ػشش اػز. ػ غبال مب ز وب ؾ غب آػيتدزيشال ثب ا ش اي اػز. لبسو ]17[. يؿ د آ س ال لذبسچي ذ سشويجبر ػ غبال ثش ااش ثش ال وذ ؿذذ ذخق ؼذش ذ. ذزاس ااش يض لبسو ػ دي اس لجي اص خش ف و ذ سجضي آ ضي بال س يذ لبث يز ثبػي ع ب سشويجبر اي اص سعذادال داس ذ. سا وب بص ويشي بص دش سئبص ب ؼش ذ. ااش زاس ػ دي اس اجضاال ػ شض س ال يض لبسچي ذ و ئ صيذ ب دذشيذي خب اد اص ذلبسچي داس بال ب ث ع س ػذبخز ثبصداس ذذ ذبال )Nikkomycin )Z يى بيؼي ب ذ )Echinocandin( اوي وب ذي خب اد داس بال اػز ويشي دي اس ثشب وب ػبخز اص )Caspofungin( وؼذ فب جي ب ذ ]18[. يو ذ ج يشال اػذز ذذلبسچي جذيذذ سشويجذبر اص اوي وب ذذي ذب سا اػذز ػذ ششبص 3 - وذب 1 ثشب آ ضي صيش ااذ و FKs1 ]19[. يد ذ لشاس ذف سد سي بسؿذذ ذ ذبال ػذ وب ؾ ي د اص و ي ع س ث 41 Pathobiology Research, Vol. 19 ( ), N

10 فاطمهسیاهمشتهوهمکاران و ششال لبسو و ع ي اي ث اػز ث د لبسو سؿذ ثبصداسال اضذ س دي ذش د يذ اػذز. ؿذذ س يذ و ششال ػ شيج دس س يذي ذبي دس ثذبوششال سؿذ اص ابك خش ف شبث يز بال اػذشبر اسيذ خذب اد اص ذب شبث يز اي اص سعذادال اػز. س ا ذبيي سشويجذبر ايذ ؼش ذ. )Propionates( دش دي بر ب آ ديؾػبص بال يب آفالس وؼي س يذ ؼيش ط بال دػش بس ؿذذ ذبس سا اثشذذاال دس آفالس وؼي س يذ ث بثشاي داس ذ. سا س يذذ ذ ذب آفالس وؼي وب ؾ ثشاال دي ش س جي اػز. اػذز. ثذبوششال س ػذظ ػذ سجضيذ و ذذ سشؿذحي سشويجذبر وذذبص آفالس وؼذذي ػذذ و ذذذ سجضيذذ آ ذذضي ذذ سذذشي اوؼيذاص بػذز. خذب اد جض و اػز )Aflatoxin laccase( ػذبخش ب دس جذ د وش ي ا م ثبصوشد ث لبدس ػ اي ثبػي ع ج غ ػ ي بال اص ثؼيبسال ]20[. اػز آفالس وؼي شا ذ دس آ ضي اي ع ؼش ذ آ ضي اي س يذ ث لبدس ]21[. يؿ د س يذ ثبوششال اػذ سال ذضاس دس آفالس وؼي ػ و ذ س يذ اك ي لبسو بال آػذشطي ع فال ع آػذشطي ع ؿب وب سصال بال ثبه ذ سد آ ي يى فبػي غ ثبػي ع ثبوششال اػز. دبساصيشيى ع اض س ح يع ي دؼش ثبه خبن اص يض سحميك اي دس اػشفبد ه ابع س ا ذبيي ثذ د. ؿذ جذاػبصال آفالس وؼي صا آػذشطي ع بال ج ذ اص ثي ذبسالصا لذبسو ص ذذ ي ح ؿشايظ ثب ػبص بسال وذ اػذز صيؼذشي و شذش ب ذ ثذه خل كذيبر سشي ثذبوششال ايذ اػذز. خل كذيز ايذ داساال ذش اب ثذبوششال داساال ثبػذي ع جذ غ ػذ ي ذبال ػذبيش ب ذذ چ ي ذذ سشويجذبر اص ػذيعي عيذف س يذذ ثذب سؿذذ ز ػش ب ذ ذ ا ثذ ثذ وذبس يشال ؼشعذ سا آ و اػز يىش ثي ]9[. ي بيذ صيؼشي و شش ثذ ي ث س ج ثب سحميك اي آ سد بال ث دػز س ج ثب خذىجبس ذضاس اص آ جذاؿذذ ظذش ذ سد ػذ ي ث د لذبسو ذبال صيؼذشي و شش ب ا ث ػ ي اي اص يس ا ثشد. ث ش آفالس وؼي ذ قدردا ی تطكر كذ بي ذ ذش دوشذشال سػب اص ثخي مب اي عب ذز اص ػي ثذي اػز ذسع سشثيز دا ب غزايي سذىش ذب ي ا بيذز ذبال ثذ د يذ دا ذ ب اي دظ ي يؿ د. لذسدا ي [1] Sforza S, Dall'asta C, Marchelli R. Recent advances in mycotoxin determination in food and feed by hyphenated chromatographic techniques/mass spectrometry. Mass Spectrom Rev 2006; 25(1): [2] Abyaneh M. Aflatoxins Recent Advances and Future Prospects. 1 st ed. Rijeka: InTech, 2013; p: 23. [3] Dini A, Khazaeli P, Roohbakhsh A, Madadlou A, Pourenamdari M, Setoodeh L, Askarian A, Doraki N, Farrokhi H, Moradi H, Khodadadi E. Aflatoxin contamination level in Iran's pistachio nut during years Food Control 2013; 30(2): [4] Farzaneh M, Shi Z-Q, Ghassempour A, Sedaghat N, Ahmadzadeh M, Mirabolfathy M, Javan- Nikkhah M. Aflatoxin B1 degradation by Bacillus subtilis UTBSP1 isolated from pistachio nuts of Iran. Food Control 2012; 23(1): [5] Akpa E, Jacques P, Wathelet B, Paquot M, Fuchs R, Budzikiewicz H, Thonart P. Influence of culture conditions on lipopeptide production by Bacillus subtilis. Applied Biochemistry and Biotechnology 2001; 91-93: آسیبشناسیزیستی دوره 91 شماره 3 پاییس 9315 پژوهشهای 34

11 تولیدآفالتوکسیهB1 کنترل [6] Obagwu J, Korsten L. Integrated control of citrus green and blue molds using Bacillus Sakuda S. Dillapiol and Apiol as specific inhibitors of the biosynthesis of aflatoxin G1 in subtilis in combination with sodium bicarbonate Aspergillus parasiticus. Biosci Biotechnol or hot water. Postharvest Biology and Biochem 2007; 71(9): Technology 2003; 28(1): [13] Siahmoshteh F, Hamidi-Esfahani Z, [7] Razzaghi-Abyaneh M, Shams-Ghahfarokhi M, Razzaghi-Abyaneh M. Antifungal activity, Rezaee MB, Jaimand K, Alinezhad S, Saberi R, biodegradation and production inhibition of Yoshinari T. Chemical composition and aflatoxins b1 and g1 by a soil isolate of bacillus antiaflatoxigenic activity of Carum carvi L., Thymus vulgaris and Citrus aurantifolia essential subtilis against aspergillus parasiticus. J Pure Appl Microbio 2016;10(4): oils. Food Control 2009; 20(11): [14] Huang J, Wei Z, Tan S, Mei X, Shen Q, Xu [8] Reddy KRN, Raghavender CR, Reddy BN, Salleh B. Biological control of Aspergillus Y. Suppression of bacterial wilt of tomato by bioorganic fertilizer made from the antibacterial flavus growth and subsequent aflatoxin B 1 compound producing strain Bacillus production in sorghum grains. Afr J Biotechnol 2010; 9(27): amyloliquefaciens HR62. J Agric Food Chem 2014; 62(44): [9] Touré Y, Ongena M, Jacques P, Guiro A, [15] Gordillo MA, Navarro AR, Benitez LM, Thonart P. Role of lipopeptides produced by Torres de Plaza MI, Maldonado MC. Bacillus subtilis GA1 in the reduction of grey mould disease caused by Botrytis cinerea on apple. J Appl Microbiol 2004; 96(5): Preliminary study and improve the production of metabolites with antifungal activity by a Bacillus sp strain IBA 33. Microbiology [10] Lee HA, Kim JH. Isolation of Bacillus Insights 2009; 2: amyloliquefaciens Strains with Antifungal [16] Thimon L, Peyoux F, Maget-Dana R, Activities from Meju. Prev Nutr Food Sci 2012; Michel G. Surface-active properties of 17(1): antifungal lipopeptides produced by Bacillus [11] Kalantari S, Jamali M, Tolouei R, Pilehvar- subtilis. J Am Oil Chem Soc 1992; 69(1): Soltanahmadi Y, Asgharzadeh A, Asmar M, [17] Ghannoum MA, Rice LB. Antifungal Aslani M, Shams-Ghahfarokhi M, Razzaghi- agents: mode of action, mechanisms of Abyaneh M. Inhibition of Aspergillus resistance, and correlation of these mechanisms parasiticus growth and aflatoxin production by antagonistic bacteria isolated from soils of with bacterial resistance. Clin Microbiol Rev 1999; 12(4): pistachio orchards. International Symposium on [18] Fortwendel JR, Juvvadi PR, Pinchai N, Mycotoxins in Nuts and Dried Fruits. Acta Hortic 2012; 963: Perfect BZ, Alspaugh JA, Perfect JR, Steinbach WJ. Differential effects of inhibiting chitin and [12] Razzaghi-Abyaneh M, Yoshinari T, Shams- 1,3-{beta}-D-glucan synthesis in ras and Ghahfarokhi M, Rezaee MB, Nagasawa H, calcineurin mutants of Aspergillus fumigatus. 43 Pathobiology Research, Vol. 19 ( ), N

12 Antimicrob Agents Chemother 2009; 53(2): [19] Lee KK, Maccallum DM, Jacobsen MD, Walker LA, Odds FC, Gow NA, Munro CA. Elevated cell wall chitin in Candida albicans confers echinocandin resistance in vivo. Antimicrob Agents Chemother 2012; 56(1): [20] Eshelli M, Harvey L, Edrada-Ebel R, فاطمهسیاهمشتهوهمکاران McNeil B. Metabolomics of the bio-degradation process of aflatoxin B1 by actinomycetes at an initial ph of 6.0. Toxins (Basel) 2015; 7(2): [21] Lončar N, Božić N, Lopez-Santin J, Vujčić Z. Bacillus amyloliquefaciens laccase--from soil bacteria to recombinant enzyme for wastewater decolorization. Bioresour Technol 2013; 147: آسیبشناسیزیستی دوره 91 شماره 3 پاییس 9315 پژوهشهای 33