Pengujian Total Fenol

Transcription

1 LAMPIRAN

2 Lampiran 1. Dokumentasi Penelitian a. Preparasi sampel Persiapan alat dan bahan Pemotongan bahan b. Analisis proksimat Penimbangan sampel Analisis kadar lemak Analisis kadar protein Analisis abu tak larut asam c. Uji total fenol Pengujian Total Fenol

3 d. Uji aktivitas antioksidan Pemipetan Sampel ditambah DPPH Sampel tanpa DPPH Pembacaan IC50 dengan Elisa reader e. Uji fitokimia Tanin Flavonoid Alkaloid Saponin Fenol Hidrokuinon Steroid dan Triterpenoid

4

5 Lampiran 2. Perhitungan Analisis Proksimat dan Abu Tak larut Asam a. Kadar air Sampel ulangan A (g) B (g) C (g) Kadar air (%) Enhalus acoroides Keterangan : A = bobot sampel awal (g) B = bobot cawan kosong (g) 1 5,30 19,75 20,58 84,34 2 5,20 18,34 19,15 84,42 Ratarata 84,38 b. Kadar abu Sampel Ulangan A (g) B (g) C (g) Kadar abu (%) Rata-rata Enhalus acoroides 1 5,30 19,75 19,83 1,51 2 5,20 18,34 18,48 2,69 2,10 Keterangan : A = bobot sampel (g) B = bobot cawan kosong (g) C = bobot sampel + cawan setelah ditanur (g)

6 c. Kadar protein Sampel Ulangan bobot sampel (g) V HCl (ml) % N Kadar protein (%) ratarata Enhalus acoroides 1 1,42 0,20 0, ,25 2 1,45 0,15 0, ,92 1,1291 Keterangan : V blanko = 0 ml FP = 10 Mr HCl = N HCl = FK = 6.25

7 d. Kadar lemak sampel Ulangan W1 (g) W 2 (g) W 3 (g) Enhalus acoroides Keterangan : Wo = bobot sampel (g) Kadar lemak (%) 1 5,12 74,47 74,48 0,19 2 5,12 77,71 77,63 1,56 W 2 = bobot sampel + labu setelah dioven (g) W 1 = bobot labu lemak kosong (g) Rata-rata (%) 0,88

8 e. Kadar abu tidak larut asam sampel Ulangan A (g) B (g) C (g) Kadar TLA (%) Enhalus ,99 23,99 0 acoroides ,99 24,00 0,2 Keterangan : A = bobot sampel (g) B = bobot cawan kosong (g) C = bobot sampel + cawan setelah ditanur (g) abu rata-rata 0,1 f. Kadar karbohidrat (by difference) % Kadar karbohidrat = 100 % - (kadar air + kadar abu + protein + lemak) = 100 % - (84,38% + 2,10% + 1,07% + 0,88%) = 11,57%

9 Lampiran 3. Perhitungan Kadar Serat Pangan a. Kadar serat pangan tak larut Sampel A B C D E IDF (%) Enhalus acoroides Blanko 0,6954 0, , ,2153 0,0035 0,7236 0, , ,9443 0,0037 Keterangan : A = Berat sampel (g) B = Berat kertas saring kosong (g) C = Berat kertas saring + residu setelah dioven (g) D = Berat cawan porselen kosong (g) E = Berat cawan porselen + abu setelah ditanur (g) Rata-rata(%) 6,7335 0,0036

10 b. Kadar serat pangan larut Nama Sampel Enhalus acoroides Blanko A B C D E SDF (mg/100 g) 0, , ,6968 0, , ,9581 0,0027 0,7012 0, , ,1163 0,0035 Rata-rata (mg/100 g) 7,9318 0,0031 Keterangan : A = Berat sampel (g) B = Berat kertas saring kosong (g) C = Berat kertas saring + residu setelah dioven (g) D = Berat cawan porselen kosong (g) E = Berat cawan porselen + abu setelah ditanur (g) c. Kadar serat pangan total Kadar serat pangan total = Kadar IDF rata-rata + kadar SDF rata-rata = 6,73 mg/100 g + 7,93 mg/100 g = 14,67 mg/100 g

11 Lampiran 4. Perhitungan Rendemen Ekstrak E. acoroides Pelarut Ulangan A (g) B (g) C (g) Rendemen Rata-rata (%) (%) Metanol , , ,480 6, , , ,332 Etil , ,2761 0,6880 0,41 Asetat , ,6557 0,1256 n- heksana , ,7238 0,1276 0, , ,8627 0,0054 Keterangan : A = bobot awal sampel (g) B = bobot botol kosong (g) C = bobot sampel+botol setelah ekstraksi (g) a. Metanol

12 b. Etil Asetat c. N-heksana

13 Lampiran 4a. Analisis Ragam Rendemen Ekstrak E. acoroides Rendemen ANOVA Sum of Squares Df Mean Square F Sig. Between Groups 46, , ,039 0,000 Within Groups 0, ,078 Total 46,618 5 Lampiran 4b. Uji Lanjut Duncan Rendemen Ekstrak E. acoroides Duncan Pelarut N Subset for alpha = N-heksana 2 0, Etil asetat 2 0, Metanol 2 6, Sig. 0,341 1,000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed. a Uses Harmonic Mean Sample Size = 2,000

14 Lampiran 5. Perhitungan Total Fenol Ekstrak E. acoroides a. Standar asam galat Konsentrasi (ppm) Absorban 0 0, , , , , , , ,686 b. Total Fenol Grafik standar asam galat Sampel bobot awal (g) A VP (ml) Bobot ekstrak awal (g) X Total fenol (mg/ml) Total fenol (mg

15 GAE/1000 g) m m e e h h Keterangan : A = nilai absorbansi (Y) VP = volume pengenceran - Perhitungan X (ppm) ekstrak metanol (ulangan 1) Y = A + BX 0,381 = - 0, , X X = 39,05 ppm - Perhitungan X (ppm) ekstrak metanol (ulangan 2) Y = A + BX 0,384 = - 0, , X X = 39,35 ppm - Perhitungan X (ppm) ekstrak etil asetat (ulangan 1) Y = A + BX 0,149 = - 0, , X X = 15,74 ppm - Perhitungan X (ppm) ekstrak etil asetat (ulangan 2) Y = A + BX 0,123 = - 0, , X X = 13,13 ppm - Perhitungan X (ppm) ekstrak n-heksana (ulangan 1) Y = A + BX 0,097 = - 0, , X X = 10,52 ppm - Perhitungan X (ppm) ekstrak n-heksana (ulangan 1) Y = A + BX 0,09 = - 0, , X X = 9,82 ppm - Perhitungan total fenol ekstrak metanol

16 - Perhitungan total fenol ekstrak etil asetat - Perhitungan total fenol ekstrak n-heksana

17 Lampiran 5a. Analisis Ragam Total Fenol E. acoroides Fenol ANOVA Sum of Squares Df Mean Square F Sig. Between Groups Within Groups Total Lampiran 5b. Uji Lanjut Duncan Total Fenol E. acoroides Duncan Pelarut N Subset for alpha = n-heksana etil asetat Methanol Sig Means for groups in homogeneous subsets are displayed. a Uses Harmonic Mean Sample Size =

18 Lampiran 6. Perhitungan Pengenceran DPPH, BHT dan Ekstrak E. acoroides a. DPPH 0,00013 M sebanyak 25 ml (Mr = 394 g/mol) DPPH sebanyak 1, 3 g ditambahkan etanol sampai 25 ml b. BHT 1000 ppm sebanyak 1 ml BHT sebanyak 1 mg ditambahkan etanol sampai 1 ml c. Larutan ekstrak

19 Ekstrak sebanyak 1 mg ditambahkan etanol sampai 1 ml Pelarut Jumlah Ditambahkan Konsentrasi 1 µl ekstrak 1000 ppm ppm 1 µl ekstrak 1000 ppm 1 µl etanol 500 ppm 1 µl ekstrak 500 ppm 1 µl etanol 250 ppm Metanol 1 µl ekstrak 250 ppm 1 µl etanol 125 ppm 1 µl ekstrak 125 ppm 1 µl etanol 62,5 ppm 1 µl ekstrak 62,5 ppm 1 µl etanol 31,25 ppm 1 µl ekstrak 31,25 ppm 1 µl etanol 15,625 ppm 1 µl ekstrak 15,625 ppm 1 µl etanol 7,8125 ppm Pelarut Jumlah Ditambahkan Konsentrasi 1 µl ekstrak 1000 ppm ppm 1 µl ekstrak 1000 ppm 1 µl etanol 500 ppm 1 µl ekstrak 500 ppm 1 µl etanol 250 ppm Etil 1 µl ekstrak 250 ppm 1 µl etanol 125 ppm Asetat 1 µl ekstrak 125 ppm 1 µl etanol 62,5 ppm 1 µl ekstrak 62,5 ppm 1 µl etanol 31,25 ppm 1 µl ekstrak 31,25 ppm 1 µl etanol 15,625 ppm 1 µl ekstrak 15,625 ppm 1 µl etanol 7,8125 ppm Pelarut Jumlah Ditambahkan Konsentrasi 1 µl ekstrak 1000 ppm 1000 ppm 1 µl ekstrak 1000 ppm 1 µl etanol 500 ppm 1 µl ekstrak 500 ppm 1 µl etanol 250 ppm N-heksana 1 µl ekstrak 250 ppm 1 µl etanol 125 ppm 1 µl ekstrak 125 ppm 1 µl etanol 62,5 ppm 1 µl ekstrak 62,5 ppm 1 µl etanol 31,25 ppm 1 µl ekstrak 31,25 ppm 1 µl etanol 15,625 ppm 1 µl ekstrak 15,625 ppm 1 µl etanol 7,8125 ppm

20 Lampiran 7. Perhitungan persen inhibisi dan penentuan IC 50 Tabel 4. Uji aktivitas antioksidan BHT Sampel BHT Konsentrasi dan Inhibisi (%) 15,63 ppm 7,82 ppm 3,90 ppm 1,95 ppm 0,98 ppm 0,49 ppm 52,83 41,04 25,39 15,87 8,62 3,85 IC 50 (ppm) 15,92 Tabel 5. Uji aktivitas antioksidan ekstrak kasar metanol Sampel Konsentrasi dan Inhibisi (%) Metanol 500 ppm 250 ppm 125 ppm 62,5 ppm 31,25 ppm 80, , , , ,6753 IC 50 (ppm) 115,79 18 Tabel 6. Uji aktivitas antioksidan ekstrak etil asetat Sampel Konsentrasi dan Inhibisi (%) 500 ppm 250 ppm 125 ppm 62,5 ppm 31,25 ppm Etil asetat 64, , , , ,0159 IC 50 (%) 153,398 4 Tabel 7. Uji aktivitas antioksidan ekstrak n-heksana

21 Sampel N- heksana 900 ppm 850 ppm 800 ppm 51, , ,8179 Konsentrasi dan Inhibisi (%) IC 50 (%) ppm ppm 17, , ppm 937,614 6, a. BHT Konsentrasi (ppm) abs BHT abs blanko Inhibisi (%) 15,6250 0,208 52,8344 7,8125 0,260 41,0430 3,9062 0,329 25,3968 0,441 1,9531 0,371 15,8730 0,9765 0,403 8,6167 0,4883 0,424 3,8548 Persamaan garis y = 14,497 ln(x) + 9,8741 IC 50 (ppm) 15,9248 1) Persen inhibisi 2) IC 50 y = 14,497 ln(x) + 9, = 14,497 ln(x) + 9, ,1259 = 14,497 ln(x)

22 ln (x) = 2,7679 x =15,9248 ppm b. Contoh perhitungan ekstrak metanol c. Contoh perhitungan ekstrak etil asetat d. Contoh perhitungan n-heksana Gambar 9 Grafik hubungan konsentrasi BHT dengan persen inhibisinya

23 Lampiran 7a. Analisis Ragam Aktivitas Antioksidan E. acoroides ANOVA IC 50 Sum of Squares Df Mean Square F Sig. Between Groups , , ,724 0,002 Within Groups 11991, ,246 Total ,161 5 Lampiran 7b. Uji Lanjut Duncan Aktivitas Antioksidan E. acoroides Duncan Pelarut N Subset for alpha = Methanol 2 115, etil asetat 2 153, n-heksana 2 937, Sig. 0,594 1,000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed. a Uses Harmonic Mean Sample Size = 2,000